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公司動態(tài)首頁 > 公司動態(tài) 有了它,你就可以放心大膽的使用細(xì)胞膜熒光探針
  • 有了它,你就可以放心大膽的使用細(xì)胞膜熒光探針
  • 點擊次數(shù):1192 更新時間:2021-08-26
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  •    細(xì)胞膜熒光探針是一種親脂性的熒光染料,可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)進(jìn)入細(xì)胞膜后,本產(chǎn)品在整個細(xì)胞膜上擴散,最佳濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱,當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強度大大增強,細(xì)胞膜熒光探針被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光,具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。可以用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC濾光片檢測。
     
      細(xì)胞膜熒光探針通常不會明顯影響細(xì)胞的生存力,因此被廣泛用于正向或逆向的,活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑。除了簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外,還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附,檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移,通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細(xì)胞膜上的擴散,檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。
     
      細(xì)胞膜熒光探針的使用方法:
      1、染色液制備:
      a、配置DMSO或EtOH 儲存液:儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1~5 mM。
      b、工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲存液,配制濃度為1~5 μM的工作液。
      
      2、懸浮細(xì)胞染色:
      a、懸浮細(xì)胞密度為1×106/mL加入到工作液中。
      b、在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞2~20分鐘,不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同。
      c、染色細(xì)胞試管在1000~1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。
      d、傾倒上清液,再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。
      e、重復(fù)c、d步驟兩次以上。
      
      3、粘壁細(xì)胞的染色:
      a、使粘壁的細(xì)胞在無菌實驗室培養(yǎng)。
      b、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過量培養(yǎng)液,將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
      c、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
      d、在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2~20分鐘,不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時間不同。
      e、吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞,培養(yǎng)5~10分鐘,然后吸干培養(yǎng)基。
      
      4、流式細(xì)胞儀檢測:
      染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。
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